पुनः संयोजक स्पाइक प्रोटीन पर आधारित पोर्सिन एक्यूट डायरिया सिंड्रोम कोरोनावायरस आईजीजी एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक अप्रत्यक्ष एलिसा पद्धति का विकास

पोर्सिन एक्यूट डायरिया सिंड्रोम कोरोनावायरस (एसएडीएस-सीओवी) एक नया खोजा गया पोर्सिन एंटरिक रोगजनक कोरोनावायरस है जो नवजात पिगलेट में पानी के दस्त का कारण बन सकता है और सुअर उद्योग को महत्वपूर्ण आर्थिक नुकसान पहुंचा सकता है।वर्तमान में, SADS-CoV संक्रमण और टीके की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए कोई उपयुक्त सीरोलॉजिकल विधि नहीं है, इसलिए इस कमी को पूरा करने के लिए एक प्रभावी एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) का उपयोग करने की तत्काल आवश्यकता है।यहां, मानव IgG Fc डोमेन के साथ जुड़े SADS-CoV स्पाइक (S) प्रोटीन को व्यक्त करने वाले एक पुनः संयोजक प्लास्मिड का निर्माण पुनः संयोजक बैकोलोवायरस के उत्पादन के लिए किया गया था और HEK 293F कोशिकाओं में व्यक्त किया गया था।एस-एफसी प्रोटीन प्रोटीन जी रेजिन से शुद्ध होता है और मानव-विरोधी एफसी और एंटी-एसएडीएस-सीओवी एंटीबॉडी के साथ प्रतिक्रियाशीलता को बरकरार रखता है।तब S-Fc प्रोटीन का उपयोग अप्रत्यक्ष एलिसा (S-iELISA) को विकसित करने और S-iELISA की प्रतिक्रिया स्थितियों को अनुकूलित करने के लिए किया गया था।नतीजतन, इम्यूनोफ्लोरेसेंस परख (आईएफए) और पश्चिमी सोख्ता द्वारा पुष्टि किए गए 40 एसएडीएस-सीओवी नकारात्मक सीरा के ओडी 450 एनएम मूल्य का विश्लेषण करके, कट-ऑफ मूल्य 0.3711 निर्धारित किया गया था।S-iELISA के रनों के भीतर और बीच में 6 SADS-CoV पॉजिटिव सेरा के वेरिएशन का गुणांक (CV) 10% से कम था।क्रॉस-रिएक्टिविटी टेस्ट से पता चला कि S-iELISA में अन्य पोर्सिन वायरस सेरा के साथ कोई क्रॉस-रिएक्टिविटी नहीं है।इसके अलावा, 111 नैदानिक ​​सीरम नमूनों का पता लगाने के आधार पर, IFA और S-iELISA की समग्र संयोग दर 97.3% थी।सीरम के 7 अलग-अलग OD450nm मूल्यों के साथ वायरस न्यूट्रलाइजेशन टेस्ट से पता चला है कि S-iELISA द्वारा पता लगाया गया OD450nm मान वायरस न्यूट्रलाइजेशन टेस्ट के साथ सकारात्मक रूप से सहसंबद्ध था।अंत में, 300 सुअर फार्म सीरम नमूनों पर S-iELISA का प्रदर्शन किया गया।अन्य पोर्सिन एंटरोवायरस के वाणिज्यिक किट ने दिखाया कि SADS-CoV, TGEV, PDCoV और PEDV की IgG सकारात्मक दर क्रमशः 81.7%, 54% और 65.3% थी।, 6%, क्रमशः।परिणाम बताते हैं कि S-iELISA विशिष्ट, संवेदनशील और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, और सुअर उद्योग में SADS-CoV संक्रमण का पता लगाने के लिए इसका उपयोग किया जा सकता है।यह लेख कॉपीराइट द्वारा सुरक्षित है।सर्वाधिकार सुरक्षित।